武漢電泳設(shè)備中電泳出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，英文成為smear，就是彌散。其原因，主要從以下兩個(gè)方面考慮：

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1、PCR產(chǎn)物自身原因：

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往往由于酶量過多或酶的質(zhì)量差，dNTP濃度過高，Mg2+濃度過高，

退火溫度過低，循環(huán)次數(shù)過多，而造成PCR的非特異性產(chǎn)物過多。

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對策：

①減少Taq酶的量，或調(diào)換另一來源的酶。

②減少dNTP的濃度。

③適當(dāng)降低Mg2+濃度。

④增加模板量，減少引物的用量，減少循環(huán)次數(shù)，提高退火溫度。

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2、電泳體系的問題：

（1）電泳緩沖液TAE或者TBE的污染，建議更換緩沖液。

（2）上樣時(shí)樣品漂了，建議增加上樣緩沖液的用量，以及小心加樣。

（3）電壓太高。

（4）適當(dāng)把你的膠的濃度加大。（根據(jù)你的片斷大小而定）

（5）觀察你的marker是否也存在拖尾現(xiàn)象，作為對照。

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PCR拖尾及假陽性的原因及對策

拖尾現(xiàn)象：產(chǎn)物在凝膠上呈Smear狀態(tài)。

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原因：

1.模板不純

2.Buffer不合適

3.退火溫度偏低

4.酶量過多

5.dNTP、Mg2+濃度偏高

6.循環(huán)次數(shù)過多

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對策：

1.純化模板

2.更換Buffer

3.適當(dāng)提高退火溫度

4.適量用酶

5.適當(dāng)降低dNTP和鎂離子的濃度

6.減少循環(huán)次數(shù)

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假陽性

現(xiàn)象：空白對照出現(xiàn)目的擴(kuò)增產(chǎn)物

原因：

靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染

對策：

1.操作時(shí)應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外；

2.除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。所用離心管及加樣槍頭等均應(yīng)一次性使用。

3.各種試劑最好先進(jìn)行分裝，然后低溫貯存

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武漢電泳設(shè)備運(yùn)行中出現(xiàn)的問題要及時(shí)應(yīng)對，有因有果，找對方法一定可以很好解決電泳設(shè)備中電泳出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象！